Thesis:

Deacilsaponina (Quillaja saponaria) como agente de absorción del péptido inmunomodulador hepcidina (Hep20) en la administración oral a trucha arcoíris (Oncorhynchus mykiss)

La salmonicultura chilena, segunda a nivel mundial, enfrenta el desafío del aumento de patógenos y del uso excesivo de antibióticos, lo que genera impactos ambientales y resistencia microbiana. En este contexto, los péptidos de defensa del huésped (HDPs) surgen como una alternativa sostenible para fortalecer la inmunidad de los peces. Entre ellos, la hepcidina 20 (Hep20), un péptido inmunomodulador derivado de Oncorhynchus mykiss, representa un modelo adecuado para estudiar estrategias que optimicen su administración oral. Dado que los péptidos pueden presentar una absorción limitada por degradación digestiva y barreras intestinales, este estudio propone evaluar el uso de la fracción deacilsaponina (Ds), obtenida de hojas de Quillaja saponaria, como un coadyuvante natural capaz de mejorar la estabilidad, absorción y efecto inmunomodulador de Hep20 administrado por vía oral. La fracción Ds fue obtenida mediante extracción acuosa, purificación y posterior hidrólisis alcalina, alcanzando un rendimiento total del 3% de 100 gramos de hojas de quillay y mostrando baja hemólisis (HD₅₀ > 100 μM) y sin citotoxicidad en concentraciones < 20 μM, validando su seguridad. La combinación Ds/Hep20 incrementó el traspaso de Hep20 en un 33% en células RTGutGC y promovió una mayor internalización del péptido en células inmunes RTS11. A nivel funcional, Ds indujo una exacerbada respuesta proinflamatoria y antiinflamatoria temprana (il-1β, tnfα e il10), en contraste, de la coadministración se observó una regulación exacerbada de una regulación compensatoria mediada por il-10, evidenciando una modulación inmunitaria equilibrada en todos los tiempos evaluados. En trucha arcoíris juveniles, la inyección de Hep20/Ds estimuló significativamente il1b e il-10 en riñón anterior y bazo, mientras que la administración oral produjo una activación predominante en el riñón anterior, principal órgano hematopoyético en peces. Durante el ensayo oral(...).

Chilean salmon farming, the second largest worldwide, faces growing challenges due to the in-creasing prevalence of pathogens and the excessive use of antibiotics, which leads to environ-mental impacts and antimicrobial resistance. In this context, host defense peptides (HDPs) have emerged as a sustainable alternative to strengthen fish immunity. Among them, hepcidin 20 (Hep20), an immunomodulatory peptide derived from Oncorhynchus mykiss, represents an ap-propriate model to explore strategies aimed at optimizing its oral delivery. Since peptides often exhibit limited absorption due to digestive degradation and intestinal barriers, this study proposes evaluating the use of the deacylated saponin fraction (Ds), obtained from Quillaja Saponaria leaves, as a natural coadjuvant capable of improving the stability, absorption, and immunomodu-latory effect of orally administered Hep20. The Ds fraction was obtained through aqueous extraction, purification, and alkaline hydrolysis, yielding a total of 3% from 100 g of Quillaja leaves and displaying low hemolytic activity (HD₅₀ > 100 μM) with no cytotoxicity at concentrations < 20 μM, supporting its safety. The Ds/Hep20 combination increased Hep20 translocation by 33% in RTGutGC cells and enhanced peptide internalization in RTS11 immune cells. Functionally, the coadministration induced an early pro-inflammatory response (il-1β, tnfα), followed by compensatory regulation mediated by il-10, demonstrating a balanced immunomodulatory profile across all evaluated time points. In juvenile rainbow trout, injection of Hep20/Ds significantly stimulated tnfα and il-10 expression in the head kidney and spleen, while oral administration resulted in a predominant activation in the head kidney, the main hematopoietic organ in fish. During the feeding trial(...).